hpv實(shí)驗(yàn)步驟問
hpv實(shí)驗(yàn)步驟
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楊淑霞主任醫(yī)師
北京大學(xué)第一醫(yī)院 向他提問
宮頸樣本采集要在宮頸轉(zhuǎn)化區(qū)獲取細(xì)胞且避污染、孕婦謹(jǐn)慎、炎癥患者先治炎癥,后將樣本置入含保存液試管處理,經(jīng)核酸提取、PCR擴(kuò)增、結(jié)果檢測(cè),依標(biāo)準(zhǔn)判讀陽(yáng)性陰性,特殊人群結(jié)合臨床癥狀綜合判斷并明確感染型別。
一、樣本采集
1.宮頸樣本采集:常用宮頸刷在宮頸轉(zhuǎn)化區(qū)(鱗柱交界區(qū))旋轉(zhuǎn)3-5圈以獲取足夠細(xì)胞,操作時(shí)需避免陰道分泌物污染樣本,采樣前24小時(shí)內(nèi)應(yīng)避免性生活、陰道沖洗或局部用藥。對(duì)于孕婦,需謹(jǐn)慎操作,防止過度刺激引發(fā)宮縮風(fēng)險(xiǎn);有陰道炎癥患者應(yīng)先治療炎癥后再采集,因炎癥可能干擾檢測(cè)結(jié)果。
二、樣本處理
將采集后的宮頸刷置入含有特定保存液的試管中,確保樣本充分洗脫到保存液內(nèi),以維持病毒核酸的穩(wěn)定性,便于后續(xù)檢測(cè)操作。
三、檢測(cè)方法——以PCR法為例
1.核酸提?。簭谋4嬉褐械臉颖纠锾崛〔《綝NA,通過裂解細(xì)胞等步驟釋放出HPV的核酸物質(zhì)。
2.PCR擴(kuò)增:利用特異性引物對(duì)HPV的特定基因序列進(jìn)行擴(kuò)增,若樣本中存在HPV病毒,相應(yīng)基因序列會(huì)被擴(kuò)增到可檢測(cè)的量。
3.結(jié)果檢測(cè):通過電泳或熒光定量等方法檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物,根據(jù)擴(kuò)增條帶或熒光信號(hào)判斷是否存在HPV感染以及具體感染的型別。
四、結(jié)果判讀
依據(jù)PCR檢測(cè)的結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn),若擴(kuò)增出目標(biāo)HPV基因片段則判定為陽(yáng)性,提示存在HPV感染,并進(jìn)一步明確具體感染的高危型或低危型別;若未擴(kuò)增出相應(yīng)片段則判定為陰性。對(duì)于特殊人群,如免疫力低下者,需結(jié)合臨床癥狀綜合判斷是否需要進(jìn)一步檢查,因?yàn)榇祟惾巳焊腥綡PV后持續(xù)感染風(fēng)險(xiǎn)可能更高。
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